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Methode de biuret Méthode de Biuret La méthode de Biuret est une méthode chimique de dosage des protéines. Principe En milieu alcalin, les protéines qui possèdent au moins 4 liaisons peptidiques forment avec les ions cuivre (Cu2+) un complexe bleu-violet. Un dosage colorimétrique est donc possible à 540nm. Le réactif de coloration utilisé est le réactif de Gornall; il est composé: de sulfate de cuivre, qui donne la coloration bleu du réactif due aux ions cuivre; d' hydroxyde de sodium, qui rend le milieu basique; de tartrate double de sodium et de potassium, qui « chelate » (piège) le ions Cu2+ et évite leur précipitation en milieu basique sous forme d'hydroxyde de cuivre Cu(OH)2 insoluble; d' iodure de potassium, pour éviter la réduction du cuivre. Tp Dosage Des Proteines Par La Methode De Biuret.pdf notice & manuel d'utilisation. Un temps de réaction d'environ 30 minutes à l'obscurité est nécessaire à l'obtention d'une coloration stable. La lecture étant spectrophotométrique, il faut cependant réaliser une gamme d'étalonnage ainsi que des témoins de compensations adaptés.
L'échantillon à doser est incubé en présence du réactif de Gornall pendant 30 minutes à température ambiante et à l'obscurité. L'absorbance à 540 nm est alors déterminée à l'aide de cuves spectrophotométriques en plastique. Mise en œuvre expérimentale Réactifs Solution de réactif de Gornall présenté en distributeur automatique. Solution étalon de protéine (ovalbumine) notée OVA: ρ (Ovalbumine; sol. étalon) = 10 g. L -1. Boisson protéinée à doser prédiluée au 1/20 ème notée BP20. Diluant (eau distillée). Réalisation du spectre d'absorption du complexe [Cu 2+ - liaison peptidique]: - Introduire 2 mL de solution OVA et 4 mL de réactif de Gornall dans un tube à essai. -Parafilmer. Bien homogénéiser pour obtenir une solution homogène. Méthode de Biuret. -Attendre 30 minutes à l'obscurité. -Ajuster à zéro contre de l'eau distillée. -Mesurer l'absorbance entre 400 nm et 800 nm par pas de 10 nm. Spectre d'absorption du complexe protéine-Cu 2+ (courbe 2) Spectre d'absorption du Gornall seul (courbe 1) Réalisation de la gamme d'étalonnage et des dosages essais -Dans une série de 8 tubes à essais, introduire respectivement: Tubes 0 1 2 3 4 5 E1 E2 Solution OVA à 10 g. L -1 (mL) - Solution BP1/20 (mL) Eau physiologique (mL) QSP 5 mL Réactif de Gornall (mL) -Parafilmer.
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