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Définition et appareillage: La chromatographie sur couche mince (CCM) repose principalement sur des phénomènes d'adsorption: la phase mobile est un solvant ou un mélange de solvants, qui progresse le long d'une phase stationnaire fixée sur une plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide de matière plastique ou d'aluminium. Après que l'échantillon ait été déposé sur la phase stationnaire, les substances migrent à une vitesse qui dépend de leur nature et de celle du solvant. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche mince alors. Les principaux éléments d'une séparation chromatographique sur couche mince sont: • la cuve chromatographique: un récipient habituellement en verre, de forme variable, fermé par un couvercle étanche. • la phase stationnaire: une couche d'environ 0, 25 mm de gel de silice ou d'un autre adsorbant est fixée sur une plaque de verre à l'aide d'un liant comme le sulfate de calcium hydraté (plâtre de Paris) l'amidon ou un polymère organique. • l'échantillon: environ un microlitre (μl) de solution diluée ( 2 à 5%) du mélange à analyser, déposé en un point repère situé au-dessus de la surface de l'éluant.
Si l'analyse, réalisée avec divers solvants et différents adsorbants, révèle la présence d'une seule substance, on peut alors considérer que cet échantillon est probablement pur. De plus, étant donné que la chromatographie sur couche mince indique le nombre de composants d'un mélange, on peut l'employer pour suivre la progression d'une réaction. La chromatographie sur couche mince est également la technique habituellement employée pour rechercher le meilleur solvant, avant d'entreprendre une séparation par chromatographie sur colonne. Adsorbants et plaques chromatographiques. Par ordre d'importance décroissante, les adsorbants employés en CCM sont: le gel de silice, l'alumine, le kieselguhr et la cellulose. Les plaques vous seront fournies prêtes à l'emploi. Choix de l'éluant. L'éluant est formé d'un solvant unique ou d'un mélange de solvants. Chromatographie sur couche mince. | slideum.com. Un éluant qui entraîne tous les composants de l'échantillon est trop polaire; celui qui empêche leur migration ne l'est pas suffisamment. Une méthode simple pour trouver l'éluant approprié consiste à préparer des solutions de l'échantillon dans différents solvants, en concentration d'environ 2 à 5% en volume.
The authors have studied Krebs qcle organic acids using and also spot tests reactions. INTRODlJCTION a method of separation chromatography and cltar;tttcriz:ttii)n on column, on paper, of the in gas phase, CHROMATOGRAPHIE DES ACIDES ORGANIQUES BIOLOGIQUES 245 TECHNIQUE A. Pdparation de l'extrait Comme la preparation des extraits est differente selon la nature du materiel Ctudie, nous presentons dans le Tableau I, quelques exemples de ces preparations. TABLEAU I PRfPARATION DES EXTRAITS et organesa" Vdgge'taux'* Urine Se'rum Tissus Total de 24 h. SCjour d'une nuit au froid pour precipiter les urates. Filtration. Frais, non hemolyse. Recueillis immediatement apres la morte et conservks au froid. HomogenCis& avec d'ethanol a 75% et garde% au froid pendant une nuit. Centrifuges et homogeneises trois fois, assemblant les surnageants. Identification des acides aminés par chromatographie sur couche minceur. Fixes avec d'ethanol B 80" G. L. bouillant. Agitation au froid avec Dowex 50 x 2 (50-100 mesh) H+ Agitation avec Amberlite-IR-rzo (50-100 mesh) H+ --f I heure.